Как да изолирам бактерии от почва

Необходими материали

• Триптичен соев бульон
• 5 ml стерилни тестови тръби с капачки
• Стерилни дървени клечки за сладолед
• Восъчна моливка за маркиране
• Държач за тестови тръби
• Хартиени кърпи
• 10 % разтвор на белина
• Бунзен горелка и кибрит
• Инокулираща лупа (инокулативна спирала)
• Триптичен соев агар
• Петри чинии
• Инкубатор
• Хладилник

Инструкции

1. Подготовка на почвата

1. Подгответе стерилна тестова тръба с 5 ml триптичен соев бульон.
2. Стерилната клечка за сладолед използвайте за събиране на малка проба почва (приблизително една чаена лъжичка) от място, където искате да изолирате бактериите.
3. Отворете тръбата, добавете почвата и разбъркайте внимателно с клечката. Затворете и запишете датата и мястото на събиране върху тръбата с восъчен молив.
4. Оставете тръбата в държача около 30 минути, за да се утаи почвата на дъното.

2. Инокулиране на питри чиния

5. Дезинфекцирайте работната повърхност с 10 % разтвор на белина и хартиени кърпи.
6. Обърнете питри чинията с агарната страна надолу. С восъчен молив начертайте буква „Т“ върху долната капачка – хоризонталната част разделя горната трета, а вертикалната – двете долни трети.
7. Запалете бунзен горелката и загрейте инокулиращата лупа в пламъка.
8. Отворете тръбата, потопете лупата в по-ясната течност над почвата и я затворете отново.

3. T‑метод за посев

9. С лупата, докосната до течността, проведете зигзагообразна линия върху агарната повърхност в областта над хоризонталната част на „Т”.
10. Загрейте лупата отново, оставете я да се охлади и докоснете крайния край на първата линия, за да създадете втора зигзагообразна линия, перпендикулярна на първата.
11. Повторете процедурата за третата линия в останалата свободна част от чинията.
12. Затворете чинията, загасете горелката и оставете лупата да изстине.

4. Вторична култура

13. Поставете чинията в инкубатор при 30 °C за 48 часа. След изтичане на времето прегледайте колониите. Изберете една, изглеждаща еднородна – това е признак, че е произлязла от единична бактерия. Обелете я с молив върху долната капачка.
14. Загрейте лупата, докоснете я до центъра на избраната колония и я пренесете върху нова питри чиния, като повторите T‑метода.
15. Отбележете датата и името на оригиналната проба на новата чиния, след което я инкубирайте отново при 30 °C за 48 часа.
16. Ако колониите на вторичната чиния са еднородни по цвят, форма и текстура, съхранете я в хладилник – това потвърждава изолирането на една бактерия.
17. При необходимост проведете допълнителни тестове (Грамово оцветяване, микроскопия, култивиране на различни среди) за идентификация.